Компания «Максим Медикал»

+7 (495) 374 62 80

Ежедневно с 9:00 до 21:00

 
Продукция

Зонды для FISH РНК Stellaris

Флуоресцентная insitu гибридизация РНК Stellaris® - технология визуализации РНК с возможностью одновременной детекции, локализации и подсчета индивидуальных молекул РНК  на клеточном уровне в фиксированных образцах при помощи флуоресцентного зонда.

Набор зондов Stellaris РНК FISH состоит из пула, состоящего из 48 уникальных зондов, каждый из которых помечен флуорофором, которые все вместе связываются  транскриптом-мишенью РНК для получения дифракционно-ограниченного пятна.

В основе технологии Stellaris®РНК  FISH очень простой протокол, не требующий специфических реагентов и специального оборудования. Результаты могут быть получены в тот же день, и протокол очень гибкий относительно типа образца, организма и приложения. Stellaris RNA FISH зонды могут быть мечены несколькими разными красителям для одновременной детекции различных мишеней РНК в мультиплексных экспериментах. Технология Stellaris RNA FISH позволяется ученым визуализировать экспрессию генов прямой детекцией, не  требует выделения, очистки и амплификации.

Протокол Stellaris  

Протокол Stellaris RNA FISH прост, состоит из 4 основных этапов, как показано ниже. Для некоторых типов образцов полный процесс может быть закончен менее, чем за сутки.

Этап A: подготовка образцов

Образец подращивается, адгезируется или разделяется на покровном стекле #1 и пермеабилизуется спиртом. Никаких протеаз не требуется!

Примечания: различия в подготовке образцов между различными организмами и типами образцов указаны в разделе Stellaris Protocols.

Шаг B: гибридизация зондов
Гибридизация может быть  закончена в течение 4 – 16 часов при +37 °C в стандартном лабораторном инкубаторе.

Шаг C: промывка образцов
Удаление гибридизационного буфера и добавление промывочного буфера с коротким инкубационными периодом позволяет удалить избыток зондов. Полное время этого этапа 1 – 1.5 часа.

Шаг D: визуализация образца
Образец подготовлен для просмотра при помощи стандартного флуоресцентного микроскопа. Мы рекомендуем использовать широкопольный флуоресцентный микроскоп хотя можно использовать и другие системы для визуализации зондов Stellaris. Обработка изображений может быть выполнена с применением ПО, использующего доступные онлайн-инструменты, которые позволяют создать из серии отптических срезов по оси Z объемное изображение объекта максимальной интенсивности.

Чувствительность & Специфичность

Разнообразие зондов в методе Stellaris RNA FISH обеспечивает как высокую чувствительность, так и специфичность. Избыточность этого метода прямой детекции сводит к минимуму вероятность ложных отрицательных и ложных положительных сигналов. Положительные сигналы идентифицируются по комбинированной локальной флуоресценции нескольких зондов. Вне мишени связанные одиночные зонды генерируют только слабую и диффузную флуоресценцию, которая значительно ниже порога обнаружения мРНК-мишеней. Малая длина зондов позволяет легко проникать в клеточный матрикс для эффективной гибридизации.

Мультиплексность

Зонды Stellaris RNA FISH доступны в широком спектре флуорофоров в видимом спектре, включая красители производства LGC Biosearch CAL Fluor® и Quasar®, и могут использоваться в мультиплексном анализе. Выбор красителей в мультиплексном анализе в значительной степени определяется фильтрами, установленным в системе визуализации, но, безусловно, возможно разработать анализ, включающий  окрашивание ядер DAPI и три набора зондов Stellaris RNA FISH, меченых репортерными красителями с минимальным спектральным перекрытием. Посетите страницу красителей и модификаций Stellaris для получения подробной информации обо всех  доступных красителях и модификациях, а также руководства по мультиплексному анализу.

Мультиплексные анализы могут быть использованы для определения корреляции уровней экспрессии между несколькими генами, сравнения набора контрольных зондов с известной экспрессией с экспрессией мишени или просто экономии времени при выполнении множества отдельных анализов. Готовые наборы зондов ShipReady - это тесты, разработанные для обнаружения хорошо известных, ранее подтвержденных мишеней, которые были успешно протестированы в лаборатории  в качестве положительного контроля. Наборы зондов ShipReadyнаиболее удобное и доступное решение по цене. Наши наборы зондов DesignReady сделаны на заказ, и вы сможете без труда разработать собственный анализ Stellaris. В нашем каталоге более 4000 профессионально разработанных наборов для многих распространенных видов и модельных организмов. Они прошли дополнительный биоинформатический анализ для обеспечения специфичности и совместимости.

Stellaris RNA FISH также можно комбинировать с существующими технологиями, такими как qПЦР, ДНК FISH, IHC (иммуногистохимия), IF (иммунофлюоресценция) и вестерн-блоттинг, чтобы обеспечить полноту исследований.

Как сделать заказ

Вы можете разработать собственный набор зондов Custom Probe Sets при помощи онлайн-инструмента Stellaris Probe Designer, абсолютно бесплатно после регистрации. Следуйте инструкциям и требованиями к последовательностям  на страницах технического блога Stellaris: Designing Stellaris RNA FISH Probes Part I: Increasing Probe Count.

И напоследок, не забудьте заказать набор буферов Stellaris Buffers, которые значительно улучшают сигнал и устраняют фон.

Полезные страницы